蛋白質(zhì)-細胞相互作用實(shí)時(shí)定量分析系統

蛋白質(zhì)-細胞相互作用實(shí)時(shí)定量分析系統

品牌介紹：

研發(fā)團隊
十年前，烏普薩拉大學(xué)研發(fā)團隊發(fā)明了SPR技術(shù)，現已成為大分子相互作用研究的*。2011年該團隊LigandTracer Green的發(fā)布，*實(shí)現了以熒光標記檢測方法在細胞和組織水平上進(jìn)行實(shí)時(shí)蛋白互作研究，為藥物研發(fā)、腫瘤研究、病毒研究及蛋白質(zhì)組學(xué)提供強大可靠的實(shí)時(shí)分析數據。LigandTracer系列產(chǎn)品成為目前*專(zhuān)業(yè)的蛋白-細胞相互作用實(shí)時(shí)分析系統，相關(guān)文獻發(fā)表于Nature以及病毒學(xué)、核醫學(xué)的*期刊。

Ligandtracer產(chǎn)品系列：

Ligandtracer Green：可滿(mǎn)足幾乎所有實(shí)驗室研究要求，采用便捷的熒光標記檢測

Ligandtracer Grey：為使用¹²⁵I標記的同位素實(shí)驗室設計

Ligandtracer Yellow：為使用¹¹¹In,¹⁷⁷Lu,¹⁸F, ¹¹C ¹³¹I和類(lèi)似標記的同位素實(shí)驗室設計

Ligandtracer White：為使用¹⁴C, ³⁵S, ³²P, ³³P ,¹³¹I和正電子放射體 (比如 ¹⁸F)標記的實(shí)驗室設計

蛋白質(zhì)-細胞相互作用實(shí)時(shí)定量分析系統

產(chǎn)品說(shuō)明：

Ligandtracer應用

蛋白質(zhì)是生命功能的主要執行者，許多蛋白質(zhì)的功能發(fā)揮是通過(guò)蛋白質(zhì)相互作用實(shí)現的。人類(lèi)細胞中約有7000種蛋白質(zhì)，其中30%在細胞膜上，控制細胞分子運作機制的信號有60%-70%由這些膜蛋白產(chǎn)生，但膜蛋白很難提純，現有的檢測大多是將膜蛋白從其所處環(huán)境中分離，這些方法不僅昂貴耗時(shí)，還可能會(huì )影響目標膜蛋白的功能。此外，蛋白互作是非共價(jià)結合的動(dòng)態(tài)過(guò)程，有相互作用往往很弱，不易檢測到，甚至有些蛋白結合或解離的時(shí)間很短，使常規的檢測方法受限。

親和力是生物分子反應達到平衡（穩態(tài)）時(shí)的理論，它反映結合的強度。動(dòng)力學(xué)是研究分子間是怎樣相互作用并達到穩態(tài)的，反映結合的快慢。有些配體受體互作有相同的親和力，卻顯示不同的動(dòng)力學(xué)。這些動(dòng)力學(xué)相關(guān)的信息在新藥篩選方面會(huì )更加有用，

LigandTracer為科學(xué)家提供了一個(gè)無(wú)需分離膜蛋白、在細胞水平上即可檢測蛋白功能的平臺，此外它還能在組織或蛋白水平檢測靶蛋白質(zhì)和其他多種生物分子之間的相互作用，并進(jìn)行實(shí)時(shí)動(dòng)力學(xué)和親和力研究。LigandTracer是*可以實(shí)時(shí)定量蛋白細胞互作的系統，也是*實(shí)現定
量細胞表面受體數量的系統。

LigandTracer系統應用于配基-受體的相互作用、抗原-抗體相互作用的免疫學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、醫學(xué)診斷、藥物研發(fā)和篩選、疾病治療等研究，涵蓋了蛋白-蛋白互作、蛋白-細胞/組織切片互作、病毒-細胞互作、藥物分子-細胞互作、細菌-細胞的結合。
﹡動(dòng)力學(xué)分析：抗體特異性、抗體與細胞的親和力、抗體的親和-解離速率（Kd常數）、抗體的結合濃度
﹡細胞表面受體定量
﹡抗體評價(jià)：親和力及特異性測定
﹡藥物研發(fā)：EC50、Emax，細胞周期研究中同步化的檢測（同位素標記）
﹡疾病治療：癌分子靶向治療藥物療效監測，抗輻射條件下DNA的合成與修復

Ligandtracer功能

親和力和動(dòng)力學(xué)測定

LigandTracer可以實(shí)時(shí)檢測蛋白互作過(guò)程，因此即使對有相同的親和力但結合解離不同的動(dòng)力學(xué)過(guò)程也能捕獲準確信息。通過(guò)比較不同濃度標記蛋白的信號峰值可計算細胞和蛋白相互作用的親和力大小。另外通過(guò)吸附與截留實(shí)驗，可以檢測蛋白結合解離過(guò)程，得到其動(dòng)力學(xué)參數。

三種不同濃度標記配體與受體結合，平滑曲線(xiàn)代表了與之匹配的互作類(lèi)型

高親和力結合的孵育時(shí)間的確定

對于高親和力抗體尤其一些治療藥物如 K_D <1 nM，常規方法所用孵育時(shí)間往往達不到假定的反應平衡而導致結果不準確。而LigandTracer實(shí)時(shí)捕獲結合解離信息，不再依賴(lài)于反應達到平衡，大大降低了實(shí)驗的盲目性和不確定性，避免了錯誤的實(shí)驗結果。

LT Green檢測FITC標記pertuzumab與SKOV3細胞HER2受體結合，Alexa Fluor ® 488標記cetuximab 與U343細胞EGFR結合。結果：即使抗體濃度達到4.4 nM，遠高于其相應K_D，反應達到平衡均超過(guò)20h。這二種抗原抗體的結合均表現出*的親和力，如果僅單獨研究親和力無(wú)法獲知反應達到平衡的時(shí)間。

Antibody-antigen interactions: What is the required time to equilibrium?Andersson K etc., Nature Preceedings (2010) 

LigandTracer Green

熒光標記檢測，對FITC標記的化合物或其它具有相同激發(fā)波長(cháng)和發(fā)射波長(cháng)的熒光標記物進(jìn)行實(shí)時(shí)觀(guān)察。

可選擇的檢測器：

*藍色（488nm）-綠色（535nm）FITC和其它類(lèi)似熒光標記

*黃色（590nm）-紅色（632nm）TexasRed和其它類(lèi)似熒光標記

*紅色（632nm）-近紅外（670nm）Alexa Fluor和其它類(lèi)似熒光標記

應用

相同的親和力，不同的動(dòng)力學(xué)

親和力是生物分子反應達到平衡（穩態(tài)）時(shí)的理論，它反映結合的強度。動(dòng)力學(xué)是研究分子間是怎樣相互作用并達到穩態(tài)的，反映結合的快慢。

LigandTracer實(shí)時(shí)反映動(dòng)力學(xué)互作全過(guò)程，相同的親和力，卻有二種不同結合解離的動(dòng)力學(xué)過(guò)程。這是傳統終點(diǎn)飽和法無(wú)法獲知的。對于fast on- fast off類(lèi)型的蛋白互作來(lái)說(shuō)，它可能在短時(shí)間內即達到平衡后不久開(kāi)始解離，但若孵育時(shí)間長(cháng)可能會(huì )在洗脫過(guò)程之前就開(kāi)始解離、當洗脫后可能已全部解離，終點(diǎn)法測定會(huì )誤以為根本沒(méi)有結合；而對slow on- slow off類(lèi)型來(lái)說(shuō)，為達到動(dòng)態(tài)平衡往往需要數小時(shí)甚至數天，但因曲線(xiàn)趨勢變化很微弱，往往會(huì )被誤以為已經(jīng)達到平衡；如果單獨靠進(jìn)一步延長(cháng)孵育時(shí)間，又存在抗體蛋白被細胞代謝掉的危險，從而結果也不準確。這些動(dòng)力學(xué)相關(guān)的信息在新藥篩選方面會(huì )更加有用，

參考文獻